发布单位:北京慧德易科技有限责任公司 发布时间:2022-6-23
在柱层析中,移动相从加入试料的一端展开到达另一端后,继续展开使各成分和移动相一起向柱外分别溶出,这就是广泛使用的所谓洗提层析(elution chromatography)。层析根据固定相与溶质(试料)间亲和力的差异分为吸附型、分配型、离子交换型(离子交换层析)等三种类型。但这并不是很严格的,有时常见到其中间类型。此外,近来也应用亲和层析,即将与基质类似的化合物(通常为共价键)结合到固定相上,再利用其特异的亲和性沉淀与其对应的特定的酶或蛋白质。
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离子交换层析根据化合物的净电荷进行分离。带负电荷或正电荷的---团共价结合于固相载体基质,分别成为阳离子交换剂和阴离子交换剂。当一个带电荷的分子加入到带有相反电荷的交换剂时,它就会被吸附,同时,带相同电荷的离子和中性分子则被洗脱到层析柱的外水体积里。带电荷分子的结合是可逆的,通常可用盐或ph梯度洗脱吸附的分子。 离子交换层析可以有多种应用,包括分离和纯化生物分子,分离无机离子,试剂和水的去离子化,盐转换以及去除金属离子、化乙锭和sds。 化合物的分离策略。如果分子在ph高于其等电点时稳定,可使用阴离子交换树脂。如果分子在ph低于其等电点时稳定,则使用阳离子交换树脂。
用分离范围宽广的凝胶过滤介质如superose, sephacryl hr依据分子量将样品分成不同组份
用含专一配体或的亲和层析介质结合目标蛋白,一步即可得到高纯度样品;亦可用各种活化偶联介质偶联目标蛋白的底物、受体等自制亲和介质
体积大的样品,往往使用离子交换层析来浓缩和粗纯化;高盐洗脱的样品再用疏水层析纯化
疏水层析用高盐吸附,低盐洗脱的原理,洗脱的样品又可直接上离子交换介质;两种方法常被交替使用