用分离范围宽广的凝胶过滤介质如superose, sephacryl hr依据分子量将样品分成不同组份
用含专一配体或的亲和层析介质结合目标蛋白,---磷灰石层析填料采购,一步即可得到高纯度样品;亦可用各种活化偶联介质偶联目标蛋白的底物、受体等自制亲和介质
体积大的样品,东曹toyopearl---磷灰石层析填料采购,往往使用离子交换层析来浓缩和粗纯化;高盐洗脱的样品再用疏水层析纯化
疏水层析用高盐吸附,低盐洗脱的原理,洗脱的样品又可直接上离子交换介质;两种方法常被交替使用
阴离子交换柱的填料是正电填料,在低盐条件下可以通过电荷相互作用吸附样品中的阴离子和负电荷物质(如dna).这些带负电的物质由于其带电量不同,分子大小不同,因而与正电填料之间的结合力也就不同.用梯度的氯离子(一般用---梯度,例如从100mm---线性梯度升高到1m---)洗脱挂柱样品时,氯离子会和结合上的物质竞争结合正电填料,伴随着氯离子浓度的不断升高,氯离子的竞争作用越来越强,东曹toyopearl---磷灰石层析填料采购,与填料结合的物质会按照亲和力从弱到强依次洗脱下来,形成独立的洗脱峰,从而将这些物质分开.
阳离子交换柱与之正好相反,柱子填料为负电荷,用钠离子洗脱结合的正电物质.
用作固定相的有硅胶、活性炭、氧化铝、离子交换树脂、离子交换纤维等,或是在硅藻土和纤维素那样的无活性的载体上附着适当的液体,也可使用其他物质。将作为固定相的微细粉末状物质装入细长形圆筒中进行的层析称为柱层析(column chromatogra-phy),在玻璃板上涂上一层薄而均的物质作为固定相的称为薄层层析(thin-layer chromatography),东曹toyopearl---磷灰石层析填料采购,后者可与用滤纸作为固定相的纸上层析进行同样的分析,即在固定相的一端,点上微量试料,在密闭容器中,使移动相(液体)从此端渗入,移动接近另一端。通过这种展开操作,各成分呈斑点状移动到各自的位置上,再根据rf值的测定进行鉴定。当斑点不易为肉眼观察时,可利用适当的显色剂,或通过紫外灯下产生荧光的方法进行观察。也可采用在种移动相展开后再用另一移动相进行展开(这时的展开方向应与原方向垂直),使各成分分离完全的双向层析(two-dimensional chromatography)。
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