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抗l体的层析分离步骤基本

都可以采用标准化的三步曲：步用protein a介质进行抗

ffffff;>l体捕获和浓缩；第二步用离子交换进行中间纯化以去除多聚体，宿主蛋白等杂质；第三步是精纯去除剩余dna，endotoxin，protein a 等微量杂质。在这三步抗

ffffff;>l体的分离纯化过程中，步的protein a亲和捕获占据分离纯化成本80%以上，也是下游分离纯化的瓶颈所在。亲和层析之所以成本高的主要原因：首先是protein a 价格昂贵，其价格是普通层析介质十几倍；第二，protein a使用寿命短，一般离子交换填料使用寿命多达1000次，而亲和填料寿命通常在100-200次；第三，protein a 用于抗

ffffff;>l体的捕获和浓缩，分子尺寸排阻填料，需要处理大体积的发酵液，而亲和步骤载量往往又低于阴阳离子交换层析，使得亲和层析介质使用量比中间纯化或精纯的要多得多。因此，要降低抗

ffffff;>l体的生产成本，解决抗

ffffff;>l体的生产瓶颈关键在于改进步protein a 亲和捕获。

层析填料寿命衰减的影响因素

样品状态

a.样品澄清度：样品越澄清对填料的寿命衰减影响越小。

b.样品粘度：样品的粘度越小，对填料寿命的影响越小。

c.样品酸碱度：过酸过碱都会加速填料寿命的衰减。

d.样品离子强度：离子强度越高填料寿命衰减的越快。

e.样品成分组成：样品成分越复杂，分子尺寸排阻填料价格，层析过程越复杂，填料的寿命衰减越快（这也与填料所处的工艺阶段吻合，东曹toyopearl 尺寸排阻填料多少钱，捕获粗纯阶段填料寿命衰减的更快，精纯阶段填料寿命衰减的慢。）

层析工艺

a.柱床高度，流速及反压越大，工艺过程填料受到的外力就会增大，尺寸排阻填料，填料的寿命衰减就会增大。

b.层析工艺过程的缓冲液的种类及洗脱的cv数也会影响填料的寿命，缓冲液越温和对填料寿命衰减影响越小，洗脱cv数越小对填料寿命衰减影响越小。